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Paper Name    真核表达载体pcDNA 3.1-β淀粉样前体蛋白裂解酶的构建及其在COS-7 细胞中瞬时表达
Author    董炜疆，宫惠琳，冯改丰
Publication/Completion Time    2006-03-22
Magazine Name    中国修复重建外科杂志
Vol    2006-20
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Paper description    目的　构建B淀粉样前体蛋白裂解酶(B2site amylo id p recurso r p ro tein cleaving enzyme, BACE) 基因 的真核表达载体, 为修复阿尔茨海默病(A lzheimer’s disease, AD) 损伤神经元奠定基础。　方法　采用RT2PCR 方法, 从人的成神经细胞瘤的总cDNA 中, 扩增出1. 5 kb 的BACE cDNA 片段, 再用BamH I 和Xho I 双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA 3. 1 中, 用限制性内切酶酶切分析和DNA 序列分析鉴定重组质粒; 以免疫细胞化学法检测BACE基因的表达情况。　结果　人BACE 基因的cDNA 已克隆到真核细胞表达载体pcDNA 3. 1 质粒中; 经脂质体转染CO S27 细胞, 并由潮霉素进行筛选, 可见转染细胞胞浆中和胞膜上有较高量的BACE 蛋白表达。　结论　成功构建了pcDNA 3. 1-BACE 的真核表达载体, 为研究BACE 基因在AD 发病机制中的作用及抑制BACE, 为治疗AD 奠定一定的实验基础。
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