近日，课题组最新研究成果以“CRISPR/Cas system-guided plasmid mutagenesis without sequence restriction”为题被自然科学综合期刊《Fundamental Research》接收，赵凤佼副教授和陈锋副教授为第一作者。热烈祝贺！《Fundamental Research》期刊是国家自然科学基金委员会主管、主办的高水平综合性英文学术期刊，内容覆盖自然科学的多个学科领域。

  质粒突变技术被用于产生具有理想催化功能的蛋白质突变体，但当前直接在质粒上生成突变的方法存在序列限制的问题。该工作利用CRISPR/Cas体系中gRNA识别序列长、位点可变的特性，能够在任意序列的质粒上可控地生成DNA缺口，从而避免了传统限制酶存在的序列限制问题。该工作将CRISPR/Cas体系用于单链环状质粒的制备，并以该质粒作为聚合模板合成突变质粒，实现多种用户自定义的突变文库的制备。该方法进一步结合理性设计用于基因编辑蛋白FnCpf1的分子改造，产生了一系列PAM-结合凹槽改变的FnCpf1蛋白质突变体。这些蛋白变体拓宽了PAM识别范围，并且呈现了更低的脱靶效应，从而放宽了基因编辑的适用范围并增加了编辑特异性。

论文链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2667325822002874